Leonardo, nejstarší a nejdisciplinovanější z mutantních želvích bratrů, se narodil v newyorských stokách jako produkt experimentu s mutagenní slizí. Jeho výchovu a výcvik v umění ninjutsu měl na starosti mistr Splinter, který se stal jeho otcem a mentorem. Leonardo se již od mládí vyznačoval neochvějným smyslem pro zodpovědnost a touhou po dokonalosti. Jeho odhodlání a strategické myšlení z něj činí přirozeného vůdce týmu. Vyniká v boji s dvěma katanami, které ovládá s chirurgickou přesností. Jeho snaha o dodržování Bushidó, kodexu samurajské cti, ho často staví do čela skupiny při střetech s padouchy, jako je například Shredder a jeho klan Foot. V osobním životě se Leonardo potýká s tlakem vedení a zodpovědností za své bratry, což ho někdy vede k vnitřním konfliktům a pochybnostem.
Klíčové momenty v životě Leonarda zahrnují jeho první setkání s Shredderem v roce 1984 v původním komiksovém seriálu Kevina Eastmana a Petera Lairda. Jeho roli jako vůdce týmu potvrdily i pozdější animované seriály, kde byl často hlavním hrdinou. Například v seriálu Teenage Mutant Ninja Turtles z roku 1987 byl Leonardo zobrazen jako ten, kdo drží skupinu pohromadě a zajišťuje, aby bratři pracovali jako tým. V hraných filmech, počínaje Teenage Mutant Ninja Turtles z roku 1990, si Leonardo udržel svou pozici vůdce, ačkoliv jeho charakter byl v těchto adaptacích často více zaměřen na emocionální stránku a vztahy s bratry. V pozdějších filmových sériích, jako například v Teenage Mutant Ninja Turtles z roku 2014 režírovaném Jonathanem Liebesmanem a Teenage Mutant Ninja Turtles: Out of the Shadows z roku 2016, byl Leonardo vykreslen s větší hloubkou, zobrazující jeho vnitřní boje a snahu najít rovnováhu mezi povinností a osobními touhami. Jeho vztah s April ONeil, novinářkou, která se stala jejich přítelkyní a spojenkyní, je také důležitou součástí jeho příběhu, protože mu poskytuje podporu a pohled z vnějšího světa.
Donatello, zvaný „Donnie“, je intelektuální síla týmu Želvích Ninja. Jeho posedlost technologií a vynálezy ho odlišuje od jeho bratrů. Donatello je mistr v oblasti elektroniky, mechaniky a kybernetiky. Jeho hlavní zbraní je bo, dlouhá tyč, kterou používá s neuvěřitelnou obratností. Vždy je připraven sestrojit nové zařízení, vylepšit stávající nebo analyzovat nepřátelskou technologii. Jeho genialita často zachraňuje tým z nebezpečných situací. Donatello je také známý svou klidnou povahou a analytickým přístupem k problémům, což z něj činí cenného člena skupiny. I když není tak fyzicky zdatný jako jeho bratři, jeho duševní schopnosti jsou nepřekonatelné.
Donatellův první významný výskyt byl v komiksu z roku 1984. V animovaném seriálu z roku 1987 byl zobrazen jako ten, kdo neustále zlepšuje jejich vybavení a vozidla, včetně slavného Turtle Van. Jeho důraz na vědu a techniku byl posílen v pozdějších adaptacích. V hraném filmu z roku 1990 byl Donatello zobrazen jako vynálezce, který pomáhá týmu v jejich boji proti Shredderovi. V sérii filmů od Michaela Baye, počínaje Teenage Mutant Ninja Turtles z roku 2014, byl Donatello vykreslen jako geniální vědec, který je schopen hacknout jakýkoli systém a vytvořit sofistikované nástroje pro své bratry. Jeho postava často slouží jako most mezi chaosem akce a logikou vědy. Zajímavostí je, že v některých verzích jeho příběhu má Donatello slabost pro April ONeil, což dodává jeho postavě další vrstvu lidskosti a romantiky. Jeho vynálezy, od komunikačních zařízení po obranné systémy, jsou klíčové pro úspěch Želvích Ninja v mnoha jejich misích.
Michelangelo, neboli „Mikey“, je komediální a nejmladší z bratrů. Jeho smysl pro humor a bezstarostná povaha často odlehčují napjaté situace. Michelangelo je mistrem nunchaku, které ovládá s neuvěřitelnou rychlostí a elegancí. Je také vášnivým fanouškem pizzy, videoher a komiksů, což z něj činí nejvíce „lidskou“ z mutantních želv. Navzdory svému zdánlivě lehkovážnému přístupu je Michelangelo loajální a statečný bojovník, který je vždy ochoten postavit se za své bratry a slabší. Jeho optimistický pohled na svět a schopnost najít radost i v těch nejhorších momentech ho činí nepostradatelným členem týmu.
Michelangelo se poprvé objevil v komiksu z roku 1984. V animovaném seriálu z roku 1987 byl jeho humor a láska k pizze výrazně zdůrazněny, což z něj udělalo velmi populární postavu u dětí. Jeho ikonické hlášky a veselé chování se staly synonymem Želvích Ninja. V hraných filmech, počínaje rokem 1990, si Michelangelo udržel svou roli „vtipálka“ skupiny, ale zároveň ukázal svou odvahu a schopnost bojovat po boku svých bratrů. V novějších filmech, jako jsou ty z roku 2014 a 2016, byl Michelangelo vykreslen jako ten, kdo přináší do týmu nejen humor, ale i emocionální podporu. Jeho vztah s ostatními želvami, zejména jeho neustálé dobírání si Raphaela, je zdrojem mnoha komických momentů. Michelangelo také často slouží jako zástupce publika, jehož reakce na situace jsou často podobné tomu, co by si myslel divák. Jeho láska k popkultuře a jeho schopnost improvizovat v boji ho činí jedinečným.
Raphael, neboli „Raph“, je nejvíce impulzivní a agresivní z bratrů. Jeho povaha je často v rozporu s Leonardaovým vůdcovstvím, což vede k častým konfliktům. Raphael je mistrem v boji s párem sai, které používá s brutální silou a efektivitou. Navzdory své drsné a někdy až hrubé vnější slupce je Raphael hluboce oddaný svým bratrům a mistru Splinterovi. Jeho ochranitelský instinkt je silný a je ochoten riskovat vše, aby je ochránil. Jeho horká krev a touha po akci ho často staví do čela útoku, i když to znamená ignorovat strategii.
Raphael se poprvé objevil v komiksu z roku 1984. V animovaném seriálu z roku 1987 byl jeho temperament a rivalita s Leonardem klíčovým prvkem děje. Jeho postava byla často zobrazována jako ten, kdo se vzpírá autoritě, ale zároveň je schopen se obětovat pro své blízké. V hraných filmech, počínaje rokem 1990, si Raphael udržel svou povahu „bad boy“, ale zároveň ukázal svou zranitelnost a hluboké city ke svým bratrům. V sérii filmů od Michaela Baye, počínaje Teenage Mutant Ninja Turtles z roku 2014, byl Raphael vykreslen s větší komplexností, zobrazující jeho vnitřní boj mezi rebelií a loajalitou. Jeho vztah s Casey Jonesem, pouličním bojovníkem, je také důležitou součástí jeho příběhu, protože sdílejí podobnou divokou povahu. Raphaelova schopnost zvládnout hněv a nasměrovat ho do boje je jeho největší silou i slabinou. Jeho emocionální vývoj v průběhu let je jedním z hlavních témat jeho příběhu.